|
Speciale
Jeg skrev mit speciale på afdeling for biokemi, August Krogh instituttet på Københavns Universitet. Specialet havde titlen "LPA-medieret regulering af den volumenfølsomme taurin frigivelse fra NIH3T3 fibroblaster". Formålet hermed var at klarlægge den intracellulære signalering, som finder sted i forbindelse med cellers volumenregulering efter en hypoton induceret cellesvulmning og se nærmere på, hvordan NADPH oxidasen bidrager til denne i NIH3T3 fibroblaster, samt undersøge effekten af lipid messengeren lysophosphatidylsyre (LPA) på dette.
Nedenfor har du mulighed for at læse abstract og resumé af mit projekt og ved interesse fremsender jeg gerne mit speciale pr. mail.
Abstract
Release of the organic osmolyte taurine is transiently increased in the NIH3T3 mouse fibroblasts following hypotonic exposure. The swelling-induced taurine release is potentiated in the presence of exogenous activators of protein kinase C (PKC) and reactive oxygen species (ROS). Phospholipase A2 (iPLA2/sPLA2) and production of ROS via the multi-component NADPH oxidase complex are involved in the activation and modulation of the swelling-induced taurine efflux, respectively. The present investigation was initiated to see whether the PLA2 product, lysophosphatidic acid (LPA) is involved in the swelling-induced ROS production and the taurine release. Addition of the lipid-messenger LPA (10 nM) and the PKC activator phorbol 12-myristate 13-acetate (50 nM, PMA) stimulates the ROS production under hypotonic conditions and potentiates the concomitant swelling-induced taurine release. Inhibition of the NADPH oxidase activity (diphenyleneiodonium chloride) and the classical, Ca2+-independent PKC activity impairs the effect of LPA and PMA on the swelling-induced taurine release. The cellular Ca2+ concentration is unaffected under hypotonic conditions in the presence of 10 nM LPA but significantly and transiently increased by 100 nM LPA.
Conclusion: LPA potentiates swelling-induced ROS production and taurine release in NIH3T3 fibroblasts and it is proposed that the LPA effect reflects an increase in the NADPH oxidase activity, which occur independent of an increase in the cellular Ca2+ concentration but is modulated by a classical PKC.
Resumé
Frigivelse af den organiske osmolyt taurin er kortvarigt øget i NIH3T3 muse fibroblaster efter en hypotont induceret cellesvulmning. Den svulmningsinducerede taurin frigivelse potentieres i tilstedeværelse af exogene aktivatorer af protein kinase C (PKC) og reaktive iltforbindelser (reactive oxygen species, ROS). Phospholipase A2 (iPLA2/sPLA2) og produktionen af ROS via NADPH oxidase komplekset er begge involveret i aktiveringen og moduleringen af den svulmningsinducerede taurin efflux.
I dette speciale undersøges om PLA2-produktet lysophosphatidylsyre (LPA) er involveret i den svulmningsinducerede ROS produktion og taurin frigivelse. Tilsætning af lipid-messengeren LPA (10nM) og PKC aktivatoren phorbol 12-myristate 13-acetat (PMA) stimulerer ROS produktionen under hypotone forhold og potentierer den følgende svulmningsinducerede taurin frigivelse. Hæmning af NADPH oxidase aktiviteten (diphenyleneiodonium chloride) og aktiviteten af Ca2+-uafhængige PKC-isoformer forringer effekten af LPA og PMA på den svulmningsinducerede taurin frigivelse. Den cellulære Ca2+-koncentration påvirkes ikke af 10nM LPA under hypotone forhold, men øges signifikant og kortvarigt af 100nM LPA.
Det konkluderes derfor, at LPA potentierer den svulmningsinducerede ROS produktion og taurin frigivelse i NIH3T3 fibroblaster, og det foreslås at effekten af LPA reflekterer en stigning i NADPH oxidase aktivitet, som sker uafhængigt af en stigning i intracellulær Ca2+ koncentration, men moduleres af klassiske PKC. |
